Методы определения резус фактора крови

Определение резус – фактора крови– это очень важный анализ в медицине. Он необходим каждому человеку и должен быть записан в специализированной индивидуальной медицинской документации. Крайне важно знать этот свой показатель, или носить с собой всегда эти данные. В любой момент может случиться нечто непредвиденное, для оказания скорой медицинской помощь значение Rh необходимо, а время на его определение иногда тратится много. Также необходимо определение резуса и при планировании беременности. Несовместимость партнеров по этой характеристике может крайне негативно сказаться на будущем здоровье малыша.

Все приемы определения резус – фактора крови делятся на:

• Лабораторные;
• Клинические.

Разница заключается в совершенстве и наличии специального оборудования и количестве времени, которое есть в наличии.

В каких случаях нужно определять

Определение группы крови и резус – фактора необходимо в случаях:

• Экстренного переливания крови (когда человек попал в автокатастрофу или другое происшествие; не всегда есть в наличии кровь универсального донора, иногда запасы весьма ограничены, и срочным образом требуются данные о Rh – принадлежности);
• При возникновении симптомов конфликтной беременности (к сожалению, не всегда уделяют должное внимание определению совместимости по Rh матери и плода, а ведь это необходимо – узнать показатель и у ребенка);
• При планировании зачатия ( определяется резус – принадлежность обоих родителей и анализируется их совместимость);
• При желании стать донором;
• Перед операцией (на случай, если потребуется переливание биожидкости) и др.

Для экономии времени (ведь иногда ситуации могут быть крайне чрезвычайны) лучше определить этот показатель у себя без экстренной надобности, чтобы в любой момент информация была доступна.

Проведение анализа у ребенка также желательно провести как можно скорее, или посмотреть в больничной карте, чтобы знать данные

Методы определения

Как уже говорилось, делятся на лабораторные и клинические. Рассмотрим наиболее часто используемые и более достоверные.

Посмотрите видео с выполнением процедуры

Анна Поняева. Закончила нижегородскую медицинскую академию (2007-2014) и Ординатуру по клинико-лабораторной диагностике (2014-2016).Задать вопрос>>

В зависимости от характера ситуации и времени, ограничивающего проведение исследования, существуют следующие виды теста:

Экспресс – методы

Проводят в случаях, когда результат нужен моментально.

На этот анализ уйдет не более 3 минут самого процесса, и какого – то времени на подготовку и взятие материала.

Используется центрифужный аппарат, в который заносят каплю взятой свежей крови (или же консервированной, главное – не свернувшейся) и вносят реагент – вещество, которое будет выступать проявителем.

Чаще берут полиглюкин, иначе говоря, антирезусовый фактор.

Результатом взаимодействия этого вещества с Rh – положительной пробой будет реакция агглютинации – образование комков и нагромождений слипшихся эритроцитов.

Размазываясь по стенкам центрифуги под воздействием силы вращения, реакция происходит очень наглядно, в течение 1 – 3 минут.

Если нет центрифуги, то берется простая пробирка, кровь смешивается с физраствором и добавляется аналогичный агент – в течение нескольких минут оценивают какому Rh – фактору принадлежит кровь.

Положительный Rh будет характеризоваться образованием сгустком и комков.

Лабораторные тесты

Их существует огромное разнообразие, рассмотрим наиболее популярные:

• Метод агглютинация в растворе соли – готовят раствор выделенных из биожидкости эритроцитов в физиологическом растворе. Совмещают с антирезусовой сывороткой и ставят в термостат. Через час осматривают то, что получилось. Клетки, как правило, выпадают в осадочный слой, его анализируют под микроскопом. Если он нитеобразный, содержащий комки и агглюттинаты, то это положительный ответ. Если же осадок равномерно распределился по дну , то Rh минус.

• Методика с желатином – проводится соединение трех растворов: эритроцитов, физиологического и 10% желатинового. Эту смесь помещают в термостат при температуре 42 градуса, выдерживают 30 минут. Вынимают и разводят десятикратным количеством натрия хлорида 0,9% концентрации. Невооруженным глазом будет видна агглютинация при положительном резусе.
• Тест Кумбса – метод очень чувствительный и используется для уточнения полученных данных (в случае затруднения диагностики). Проходит определение в две фазы:

1. Первая – эритроциты обрабатываются неполными антителами, которые их не склеивают, но обволакивают в характерную оболочку (при наличии Rh +).
2. Далее добавляется специальная сыворотка, чувствительная к компонентам этой оболочки (если она образовалась). Реакция агглютинации – будет признаком положительного резуса.

• Тест с анти – D – моноклональными антителами. Исследование проводится на предметном стекле, капля биоматериала смешивается с каплей реагента. Лепестковая агглютинация – признак значение «+»;
• Исследование на чашке Петри (конглютинация) – используется несколько сывороток — антирезус для каждой кровяной группы (копаются подряд на чашку). Далее прибавляют к каждой капле по одной биоматериала. Перемешивают и ставят нагревать на специальном оборудовании. Если происходит хотя бы в одной и образцов свертывание элементов, значит ответ «+».

• Тест с помощью антигенов, называющихся цоликлонами – исследование, как и все другие основано на визуальной оценке выпадения в осадок эритроцитов. Только в качестве антигена берется цоликлон – вытяжка из асцитной жидкости лабораторных мышей. Алгоритм выяснения данных тот же.

Преимущества и недостатки различных анализов на определение

Техника определения группы крови – Rh по экспресс методу имеет ряд преимуществ:

• Относительная точность;
• Быстрота диагностики;
• Наглядный результат;
• Легкость проведения;
• Минимальное количества реагентов и аппаратуры;
• Доступность для любого медицинского учреждения;

Определение группы крови и резус в лабораторных условиях безусловно намного достовернее, но требует большего количества времени, по сравнению с многочисленными экспресс – методиками, также является недоступным для многих учреждений, или же может затормозить сам процесс диагностики из – за отсутствия нужных реактивов в арсенале лаборантов.

Их основными плюсами будут:

• Высокий уровень достоверности;
• Возможность использования в качестве повторной диагностики и уточнения результата;
• Относительная легкость проведения (при высоком показателе точности);
• Использование специализированной аппаратуры (повышающей точность исследования).

Врач выбирает сам, с помощью которого типа он будет получать необходимые сведения по резус – принадлежности.

Это во многом зависит от количества минут или часов для получения данных.

Например, определение резус – фактора плода по крови матери всегда рекомендуется проводить лабораторными тестами, так как их точность крайне высока, а ошибка в данном случае недопустима и может повлечь за собой не соответствующее лечение.

Какой результат получается

Суммируя все полученные данные можно сделать вывод, что суть всех реакций – это агглютинирующее влияние сывороток – антигенов на эритроциты.

Показатель положительного фактора – это склеивание и формирование агрегатов.

Нулевые изменения сопутствуют отрицательной крови на исследуемый фактор.

Точность исследований

В настоящее время практически все лабораторные тесты имеют стопроцентную гарантию на достоверность.

Единственными факторами, которые могут исказить данные могут стать неадекватные условия для проведения самой процедуры. Неисправность термостата или попадание инородных химических реагентов в место химического взаимодействия.

Здесь все зависит от квалификации лаборантов и чистоты самой лаборатории.

Единственное, какое определение до сих пор не имеет стопроцентной гарантии – это анализ крови плода по крови матери.

Разрабатываются новые и уникальные способы диагностики.

Вывод

Кровеносная система – это основной элемент здорового функционирования организма. По ней разносятся ко всем жизненно-важным органам и системам кислород и питательные вещества.

Для оказания первой медицинской помощи необходимо знать все ее параметры.

В некоторых случаях счет идет на секунды, поэтому стоит побеспокоиться об этом заранее.

Все методы определения резус-фактора делятся на способы, применяемые в клинике: в условиях приемного покоя, в операционной, на отделении у постели больного и т. д., не требующие специального лабораторного оснащения, и лабораторные способы.

Способы определения резус-фактора в клинике. Используются два так называемых экспресс-метода: экспресс-метод со стандартным универсальным реагентом в пробирке без подогрева. Экспресс-метод на плоскости без подогрева.

Экспресс-метод определения Rh-фактора стандартным универсальным реагентом в пробирке без подогрева.

Для исследования может быть использована свежая несвернувшаяся кровь, взятая из пальца (из вены) непосредственно перед исследованием, или консервированная кровь без предварительной обработки, а также эритроциты из пробирки после формирования сгустка и отстаивания сыворотки.

Методика проведения реакции

Исследование проводят в центрифужных пробирках объемом не менее 10 мл. На дно пробирки вносят одну каплю стандартного универсального реагента, представляющего собой антирезусную сыворотку группы АВ (IV), содержащую 33% раствор полиглюкина. Затем в нее добавляют одну каплю исследуемой крови (или эритроцитов). Круговым вращением пробирки содержимое размазывают но ее внутренней поверхности таким образом, чтобы содержимое растеклось по стенкам. Это значительно ускоряет агглютинацию и делает ее крупнолепестковой. Агглютинация на стенках пробирки наступает, как правило, в течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса «антиген — антитело» и четкой агглютинации наблюдать следует не менее 3 минут. Затем для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2-3 мл физиологического раствора и перемешивают путем одно-двукратного перевертывании пробирки (без взбалтывания!).

Наличие агглютинации (крупные хлопья на фоне просветленной жидкости) указывает на резус-положительную принадлежность исследуемой крови. Отсутствие агглютинации (в пробирке гомогенно окрашенная розовая жидкость) свидетельствует о резус-отрицательной принадлежности.

Лабораторные методы определения резус-фактора

Для определения резус-принадлежности крови больного в условиях лаборатории применяют четыре основных метода.

Метод агглютинации в солевой среде

Используют специальные сыворотки, содержащие полные антитела анти-резус. Эритроциты в виде 2% взвеси в изотоническом растворе хлорида натрия соединяют в пробирках с антирезусной сывороткой. Пробирки помещают на 1 час в термостат при температуре 37°С, после чего осадок эритроцитов на дне пробирки рассматривают с помощью лупы и по его форме учитывают результат. При положительном результате (Rh+) осадок имеет характерный рисунок в виде нитей или зернистости. При отрицательном (Rh-) осадок размещается равномерным слоем и имеет вид правильно очерченного круга.

Метод конглютинации с желатином

В пробирку помещают равные объемы исследуемых эритроцитов, антирезусной сыворотки и 10% раствора желатина. Пробирки инкубируют при температуре 45-48є C, после чего добавляют десятикратный объем физиологического раствора. Пробирки 2-3 раза переворачивают и учитывают результат по наличию агглютинации, видимой невооруженным глазом.

Непрямой антиглобулиновый тест (реакция Кумбса)

Эта реакция является наиболее чувствительной для выявления неполных антител к ауто- и изоантигенам эритроцитов. К ней, как правило, прибегают при возникновении трудностей в определении резус-принадлежности крови, связанных с нечеткими результатами, полученными при других методах исследования. Реакция основана на использовании антиглобулиновой сыворотки (АГС). При обработке резус-положительных эритроцитов неполными антителами анти-Rh наступает их обволакивание (сенсибилизация) по отношению к АГС, которая и агглютинирует сенсибилизированные эритроциты, поскольку имеет антитела к глобулинам.

В пробирку вносят антирезусную сыворотку и отмытые физиологическим раствором эритроциты; помещают на 1 час в термостат при температуре 37°С, после чего эритроциты тщательно отмывают. Последующий этап реакции проводят на плоскости. Каплю взвеси эритроцитов смешивают с равным количеством антиглобулиновой сыворотки и учитывают результат. Наличие агглютинации является показателем того, что исследуемый образец крови резус- положительный. Если агглютинация отсутствует, испытуемая кровь — резус-отрицательная.

Реакция с aнти-D-моноклональными антителами.

На планшете смешивают большую каплю (0,1 мл) анти-D-моноклональных антител (МКА) и маленькую каплю (0,01мл) исследуемой крови. За реакцией наблюдают в течение 2,5 мин. При смешивании анти-D-МКА образцами резус-положительных эритроцитов отмечается быстрое наступающая лепестковая агглютинация. Если кровь резус-отрицательная — агглютинация отсутствует.

Резус-фактор – это содержание особого белка в крови.

Rh-фактор – это белковый антиген, содержащийся в эритроцитах людей и обезьян типа макака-резус.

В 1940 г. Ланштейнером и Винером были выявлены и обнаружены у обезьяны макаки – резус. Большинство людей (85 %) являются носителями резус-фактора (Rh+), 12-13 % — не имеют этого фактора (Rh-).

При переливании крови мы должны учитывать Rh-фактор, определяя его в крови донора и крови реципиента. Если это не учитывать => резус конфликт, что часто приводит к смертельному исходу (т.е. если Rh- больному перелить Rh+ кровь, то вырабатываются антитела – агглютинины, и если повторно перелить ему Rh+ кровь, то произойдет агглютинация, следовательно, анафилактический шок, смерть). Rh имеет значение и при беременности: если мать Rh-, а плод Rh+ — вырабатываются антитела. Особенно тяжело при второй беременности.

Определение Rh-фактора в крови:

I способ: На тарелку капаем каплю сыворотки антирезус (содержит антитела) (левая), рядом капаем вторую каплю сыворотки контрольной (правая). Рядом помещаем капли крови из пальца больного, объем их – половина капли сыворотки. Размешиваем палочкой, покачиваем. Через 3-4 мин. в обе капли добавляем NaCl 0,9 %, на пятой минуте учитываем результат. Если в левой капле – агглютинация, а в правой нет, то Rh+. Нет агглютинации в обеих каплях – Rh–.

В 1940 г. Ланштейнером и Винером были выявлены, обнаружены у обезьяны макаки – резус. Большинство людей являются носителями резус-фактора и называются Rh+, 12-13 % не имеют этого фактора – Rh–. Может быть 6 антигенов-резус. Rh белкового происхождения находятся на поверхности эритроцитов – антиген. При переливании крови, кроме агглютиногенов А и В следует учитывать Rh-фактор – резус-агглютиноген врожденное свойство эритроцитов человека обусловленное присутствием в них антигенов-резус. Rh не зависит от признаков др. групповых систем, передается по наследству и не меняется в течении всей жизни (6 антигенов: Д, С, Е, d, c,e). Rh имеет значение при переливании крови и беременности (если мать Rh(-), а плод Rh(+) – вырабатываются антитела. Особенно тяжело при повторной беременности).

Если Rh(-) больному перелить Rh(+) кровь, то вырабатываются антитела (агглютинины) и если повторно перелить ему Rh(+) кровь, то произойдет агглютинация, анафилактический шок, смерть.

Применяют 5 экспресс- методов:

Для определения нужен универсальный реагент антирезус, стандартные Rh(+) и Rh(-) эритроциты для контроля, пробирки, пипетки Пастера, 0,9 % р-р NaCl. Для определения Rh могут быть использована свежая несвернувшаяся кровь из пальца непосредственно перед исследованием или консервированная без всякой предварительной обработки, и также эритроциты из пробирки после образования сгустка и отстаивания сыворотки.

1. Полиглюкиновый экспресс-метод: на дно пробирки нанести 1 каплю стандартного реагента антирезус, разведенного 30 % р-ром полиглюкина и каплю исследуемой крови, перемешать встряхиванием и медленно поворачивать, наклоняя пробирку почти до горизонтального положения, чтобы содержимое растеклось по стенке пробирки (получается более выраженная реакция). Агглютинация наступает в течении первой минуты. Однако для получения четко выраженной агглютинации (учитывая возможность слабо выраженной агглютинобельности эритроцитов) следует продолжать не менее 3-х мин. Затем для исключения неспецифической агглютинации эритроцитов необходимо добавить 2-3 мл 0,9 % NaCl и перемешать не взбалтывая, а 2-3 раза поворачивая пробирку. Оценивается визуально. Одновременно с исследованием крови донора проводится контрольное исследование стандартных эритроцитов Rh(+) и Rh(-), обязательно одногруппных с исследуемой кровью. Оценка результата: наличие агглютинации в виде крупных хлопьев – из эритроцитов на фоне просветленной жидкости указывает на Rh(+) реакцию исследуемой крови, отсутствие агглютинации (гомогенно окрашенная жидкость в пробирке) – Rh(-). Результат учитывается как истинный после проверки контрольных образцов, т.е. при (+) результате со стандартным Rh(+) эритроцитами и отсутствие агглютинации со стандартными Rh(-) эритроцитами.

2. Альбуминовый экспресс-метод: 1967 г. Основан на использовании сывороток антирезус, разведенных 20-30 % р-ром альбумина, в присутствии которого сыворотки подобно групповым приобретают способность агглютинировать эритроциты на плоскости при комнатной tо. Исследование проводят одновременно с определением групп крови на той же пластинке. Под соответствующим обозначением помещают по одной капле тестовой и контрольной сывороток. Последней служит разведенная альбумином сыворотка группы АВ(IV), не содержащая Rh-антител. К сывороткам добавляют исследуемую кровь в количестве ½ объема взятой сыворотки и перемешивают, кровь берут из пальца, а также используют эритроциты со дна пробирки после центрифугирования. Пластинку покачивают в течении 3-4 мин., добавляют одну каплю 0,9 % р-ра NaCl и учитывают реакцию. При наличии агглютинации – Rh(+), при отсутствии – Rh(-).

3. Фициновый экспресс-метод: 1967 г. Кровь с пальца (0,01 мл) в начале помещают в равный объем 1-1,5 % р-р фицина, а затем переливают с 0,02 мл сыворотки антирезус, разведенный низкомолекулярным декстратом с отношением молекулярной массы 2000-5000. Реакцию проводят на фарфоровых пластинах. Агглютинация Rh(+) эритроцитов появляется быстро и выражено.

Другой вариант: капли тестовых реактивов высушивают на специальных картонных карточках, имеющих полимерное покрытие. Карточки хранят в герметичных конвертах. Перед исследованием высушенные реактивы растворяют каплями воды, добавляют исследуемую кровь с фицином, карточку после реакции подсушивают и используют в качестве документа.

4. Протелиновый экспресс-метод: 1970 г. На пластинку в две точки наносят по 1 капле 50 % взвеси испытуемых эритроцитов или крови и добавляют по 1 капле 1-2 % р-ра протелина. Через 1 мин. к 1 капле добавляют сыворотку антирезус; другая капля – контроль. Результат учитывают через 5 мин. с момента добавления сыворотки антирезус (при легком покачивании), результат – в капле с сывороткой антирезус наблюдается агглютинация эритроцитов (Rh(+)).

5. Гепариновый экспресс-метод: 1962 г. Основан на использовании сывороток антирезус, к которым предварительно добавлен гепарин. На предметное стекло помещают каплю сыворотки и небольшую каплю цельной крови. Предметное стекло покачивают 5 мин., слегка нагревая под настольной лампой, читают результат. Rh(+) эритроциты показывают четкую агглютинацию.

Источник: women-land.ru